小動(dòng)物活體成像實(shí)驗(yàn)步驟通常包括光學(xué)標(biāo)記、構(gòu)建動(dòng)物模型和活體動(dòng)物成像三大部分，以下是詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、光學(xué)標(biāo)記
質(zhì)粒構(gòu)建與擴(kuò)增純化
制備帶有熒光素酶報(bào)告基因（如luc基因）或編碼熒光蛋白基因的真核表達(dá)質(zhì)粒。
對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行擴(kuò)增和純化，以獲得足夠的質(zhì)粒用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染與篩選
選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的目標(biāo)細(xì)胞，將細(xì)胞接種于培養(yǎng)板中，待細(xì)胞融合度達(dá)到適宜范圍（如80%~90%）后進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
將目標(biāo)細(xì)胞、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑及足量的質(zhì)粒載體懸浮液共培養(yǎng)一段時(shí)間（如6小時(shí)），之后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)液。也可采用電轉(zhuǎn)染等方式提高轉(zhuǎn)染效率。
轉(zhuǎn)染后，使用抗生素（如G418）進(jìn)行篩選，直至出現(xiàn)單細(xì)胞抗性克隆。
對(duì)單一抗性克隆進(jìn)行傳代培養(yǎng)，并使用熒光素酶活性檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)熒光素酶活性，保留熒光值高的細(xì)胞克隆繼續(xù)傳代培養(yǎng)。
陽(yáng)性克隆鑒定
經(jīng)過(guò)多代傳代培養(yǎng)后，再次檢測(cè)熒光素酶活性，保留熒光值維持較高的克隆直至穩(wěn)定。
熒光素酶活性最高的幾個(gè)克隆即為陽(yáng)性克隆，可用于后續(xù)的動(dòng)物模型構(gòu)建。
二、構(gòu)建動(dòng)物模型
細(xì)胞準(zhǔn)備
將篩選出的陽(yáng)性克隆細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)，直至達(dá)到足夠的數(shù)量。
使用適當(dāng)?shù)募?xì)胞懸液（如PBS）將細(xì)胞重懸至適宜的濃度。
動(dòng)物選擇與麻醉
選擇適宜的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（如小鼠），并根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇性別、年齡和體重等。
對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行麻醉，以確保其在成像過(guò)程中保持靜止。
細(xì)胞接種
根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇適當(dāng)?shù)慕臃N方式（如尾靜脈注射、皮下移植、原位移植等）。
將準(zhǔn)備好的細(xì)胞懸液接種到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體內(nèi)，并觀察其生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移情況。
三、活體動(dòng)物成像
成像前準(zhǔn)備
將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物放入成像暗箱平臺(tái)中，并調(diào)整平臺(tái)的升降以獲得合適的視野。
根據(jù)成像需求選擇合適的激發(fā)和發(fā)射濾片（對(duì)于熒光成像）或注射相應(yīng)的底物（對(duì)于生物發(fā)光成像）。
成像操作
對(duì)于熒光成像，打開(kāi)激發(fā)光源并拍攝熒光圖像。
對(duì)于生物發(fā)光成像，在注射底物后等待一段時(shí)間（如10分鐘），然后關(guān)閉外界光源并拍攝由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)發(fā)出的光。
將拍攝的背景圖與生物發(fā)光圖像疊加，以清晰地顯示實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)光源的位置。
圖像分析
使用專業(yè)的圖像分析軟件對(duì)拍攝的圖像進(jìn)行處理和分析。
選定感興趣的區(qū)域進(jìn)行測(cè)量和數(shù)據(jù)處理，以獲得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
后續(xù)處理
根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行后續(xù)處理，如取腫瘤組織進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)分析等。
以上步驟可能因?qū)嶒?yàn)條件、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和成像技術(shù)的不同而有所差異。在實(shí)際操作中，應(yīng)根據(jù)具體情況進(jìn)行調(diào)整和優(yōu)化。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格遵守相關(guān)的實(shí)驗(yàn)規(guī)范和倫理要求。
